Тромбоциты, подсчет врачом по Фонио (микроскопия)

Подробное описание исследования

Общее описание тромбоцитов

Тромбоциты – это мельчайшие безъядерные клетки крови, участвующие в процессах свертывания крови. Активируют систему гемостаза при повреждении стенки сосудов. Это возможно, как защитный механизм - в результате травм, так и при патологических процессах - с образованием тромбов. В норме тромбоциты выполняют ангиотрофическую функцию (нормальная проницаемость и резистентность стенок микрососудов), адгезивно-агрегационную (запуск остановки кровотечений), актифируют фибринолиз с рассасыванием образовавшихся сгустков. При развитии патологических реакций способны переносить в крови ЦИК (циркулирующие иммунные комплексы), поддерживать спазм сосудов, задействованы в развитии некоторых аутоиммунных заболеваний (болезнь Бехтерева, синдром Чарг-Стросса и другие аутоиммунно-аллергические васкулиты).

Главная функция тромбоцитов – обеспечение нормального гемостаза. При резком снижении количества тромбоцитов возникает риск кровотечений, при возрастании – риск тромбозов. Норма количества тромбоцитов зависит от возраста пациента и указывается на бланке результатов, автоматически.

Уровень в крови – это примерно две трети запасов тромбоцитов в организме. Еще треть их массы запасается в селезенке для экстренных расходов на случай кровотечений. Для них характерны суточные колебания – до 10%, но, при этом уровень тромбоцитов все-равно должен оставаться в пределах референса. У женщин во время менструации количество тромбоцитов может снижаться, до 25-50%. Также, уровень тромбоцитов (при отсутствии острого действия провоцирующих факторов, воспаления, кровотечений, интоксикаций) длительно неизменен для конкретного пациента, формируя его индивидуальную норму. Правильнее сравнивать изменения именно с учетом обычной концентрации их в крови пациента.

При нормальных скорости синтеза и разрушения, в балансе, срок жизни тромбоцитов – 7-10 дней. Поэтому, изменение концентрации в крови наступает с небольшой отсрочкой, при действии неблагоприятных факторов.

Клинические прояления дефицита тромбоцитов (склонность к кровоточивости – десен, появлению множественных синяков на коже, обильным маточным кровотечениям) обычно проявляются при тромбоцитопении, т. е. снижении ниже 130 (10^9/л). Особенно заметны проявления, возникают спонтанные кровотечения - при падении тромбоцитов ниже 50 (10^9/л). Риск тромбозов наиболее выражен при тромоцитозах – повышении до 1000 и выше (10^9/л).

Описание анализа по Фонио

Для гематологических пациентов, при некоторых транзиторных состояниях активации свертывающей системы крови, при выраженном снижении уровня тромбоцитов в крови, в дополнение к исследованию их на аппарате проводится визуальная оценка по Фонио - количества и морфологии. Это позволяет уточнить их концентрацию в ситуациях, когда при исследовании на анализаторе часть тромбоцитарных пластинок слипается друг с другом и может быть занижен результат или анализатор выдает ошибку – не может корректно сосчитать. Проводится проверка их количества визуально.

В наших лабораториях проверка соответствия количества по Фонио проводится бесплатно при уровнях тромбоцитов ниже 130 (10^9/л). Исследование по Фонио при других концентрациях проводится при заказе услуги A12.05.120 Тромбоциты, подсчет врачом по Фонио (микроскопия), совместно с общим анализом крови или развернутым.

Сначала проводится определение концентрации эритроцитов на анализаторе. Потом врач готовит мазок крови на стекле и комбинацией красителей окрашивает элементы крови, чтобы каждый из них приобрел свой цвет в зависимости от вида клеток, степени их зрелости, наличия токсических включений, вакуолей и т.д. При микроскопии вручную подсчитывается каждый тромбоцит и количество эритроцитов в одних и тех же полях зрения. Далее врач вычисляет концентрацию тромбоцитов по отношению к концентрации эритроцитов

Также, функциональная активность тромбоцитов связана с их размерами. Преобладание фракций крупных, гигантских или микроформ тромбоцитов – это важный знак для гематолога. Это позволяет провести дифференциальную диагностику различных заболеваний и состояний, чтобы провести профилактику осложнений, компенсацию текущего состояния.

На гематологических анализаторах размеры тромбоцитов можно проверить по показателю MPV (средний объем тромбоцитов), а тенденцию к преобладанию определенных фракций (по макро- и микроразмерам), разброс значений - по показателю PDW (распределение тромбоцитов по объему). Но проблема в том, что не все машины могут их измерить, плюс это невозможно при микроаггрегациях тромбоцитов. В мазке крови по Фонио (при визуальной оценке) показателю PDW соответствует «Анизоцитоз», который врач оценивает полуколичественно, в крестах, по степени выраженности, от одного до четырех.

Кроме оценки количества и морфологии, второй момент, это выявление групп пациентов, у которых обнаруживается выраженная разница между подсчетов тромбоцитов по Фонио и/или на анализаторе в пробах крови с 3,2%-цитратом, по сравнению с измерением на анализаторе стандартных проб крови, взятых с консервантом ЭДТА.

Проводятся парные тестирования проб с одновременным взятием крови в две пробирки с разными консервантами, плюс подсчет по Фонио, визуально. Чаще это связано с ЭДТА-ассоциированной агрегацией тромбоцитов (ЭДТА-ассоциированной псевдотромбоцитопенией). Очень важно выявлять этих пациентов, чтобы им не было назначено неправильное лечение или лишние диагностические процедуры, назначаемые при истинном дефиците тромбоцитов. Только в ряде случаев показан дальнейший диагностический поиск и уточнение причин этого феномена (эндемичные районы по заболеваемости шистосомозом, контроль рецидивов гематологических, аутоиммунных заболеваний). Само это состояние не является патологией и не требует лечения, может возникать и проходить в любые сроки. Чаще связано с изменением иммунологического статуса и выработкой каких-либо антител в организме. При контакте такой крови с ЭДТА-консервантом, особенно при охлаждении пробирки ниже температуры тела, тромбоцитарные пластинки начинают слипаться между собой, с участием антител, реагирующих с их рецепторами.

Кровь таких пациентов должна быть исследована по Фонио для расчета истинного количества тромбоцитов.

А пациент должен предварительно информировать лабораторию: пробы всегда берутся в пробирки только с консервантом 3,2%-цитратом с немедленным выполнением, без длительной транспортировки.

Метод исследования, анализаторы и реагенты

Автоматические анализаторы Advia 2120i (Siemens, Германия) и XN-550 (Sysmex Corporation, Япония) для предварительного определения концентрации клеток.

Ручной метод – стеклопрепарат с дифференцированным окрашивание элементов крови и визуальный подсчет врачом тромбоцитов с вычислением их концентрации, используя данные анализатора по концентрации эритроцитов в крови.

Исследуемый материал

Цельная кровь с К3ЭДТА (венозная или капиллярная)

Подготовка

Последний прием пищи – за 3-4 часа до исследования, с исключением жирных продуктов (масло, сыр, майонез, жирные и жареные продукты) и переедания. Рекомендуется пить теплую воду за 1,5-2 часа до взятия крови. Исключить несвойственные физические и эмоциональные нагрузки, сауну, воздержаться от алкоголя за 1-2 суток, не курить за 1 час.

Показания

• Уточнение количества тромбоцитов (первичных данных с анализатора);
• ЭДТА-ассоциированная агрегация тромбоцитов (выявление и последующие тестирования);
• Визуальная оценка размеров и морфологии тромбоцитов для диф. диагностики заболеваний и состояний, выявления нарушения функций тромбоцитов;
• Выявление пациентов со склонностью к агрегации тромбоцитов.

Расшифровка

Причины понижения (тромбоцитопения):

• Снижение образования тромбоцитов: после вирусных инфекций, в т. ч. коронавирусной, во время риккетсиоза, малярии, токсоплазмоза, после интоксикаций (прием препаратов, угнетающих кроветворение, многих антибиотиков, при уремии, заболеваниях печени), ионизирующего облучения, при опухолевых заболеваниях (замещение кроветворной ткани костного мозга клетками опухолей или соединительной тканью - острый лейкоз, апластическая анемия и миелофтиз, метастазы рака и саркомы в костный мозг), мегалобластных анемиях (дефицит фолиевой кислоты и витамина В12) и длительных аутоиммунных гемолитических анемиях, а также у недоношенных новорожденных;
• Повышенное разрушение тромбоцитов: чаще аутоиммунная тромбоцитопеническая пурпура (болезнь Верльгофа, а также вторичная аутоимм. тр. пурпура на фоне заболеваний с образованием аутоантител к тромбоцитам – при системной красной волчанке, хроническом гепатите, хроническом лимфолейкозе, вирусном паротите, ветряной оспе, приеме некоторых препаратов и у новорожденных при проникновении материнских аутоантител), а также при увеличении селезенки (от любых причин, от цирроза печени, портальной гипертензии, застойной сердечной недостаточности до лимфопролиферативных заболеваний), т.к. в тканях селезенки идет разрушение тромбоцитов, больше обьем ткани – интенсивнее процесс утилизации тромбоцитов;
• Повышенное потребление тромбоцитов: чаще при ДВС-синдроме (тяжелое осложнение гестозов беременных, на фоне ожегов, сепсиса, тромбоэмболий, тяжелых травм). Реже встречаются повреждения тромбоцитов - при протезировании клапанов сердца, экстракорпоральном кровообращении, массивных гемотрансфузиях;
• Снижение при подсчете на анализаторе, но с нормальным количеством тромбоцитов по Фонио: агрегации тромбоцитов (слипания) при склонности к тромбозам, при их неспецифической активации во время взятия (микросгустки, технический единичный брак проб, не связанный с патологией), при ЭДТА-ассоциированной агрегации тромбоцитов;
• Физиологические: во время менструаций;
• Прием противоопухолевых препаратов (метотрексат, аспарагиназа, цисплатин, циклофосфамид, актиномицин D, азатиоприн, бисульфан, хлорамбуцил, цитарабин, дикарбазин, диунорубицин, доксорубицин, этопозид, мехлорэтамин, меркаптопурин, нитрозомочевина, пликамицин, прокарбазин, тиогуанин, винбластин, редко - винкристин);
• Прием препаратов, с индивидуальными тромбоцитопеническими реакциями: анальгетиков (аспирин, кодеин, ацетаминофен, антипирин, меперидин), нестероидных НПВС (ибупрофен, индометацин, напроксен, оксифенбутазон, фунацетин, фенилбутазон, параметадион, фенитоин, триметадион, вальпроевая кислота), антигистаминных (хлорфенирамин, дифенгидрамин), противомикробных (сульфаниламиды, пенициллин, эритромицин, стрептомицин, тетрациклины, ванкомицин, рифампицин, p-аминосалициловая кислота, амфотерицин В, цефалоспорины, хлорамфеникол, клондамицин, клотримазол, изониазид, новобиоцин, органические препараты мышьяка, пиразинамид, стибофен), антитиреоидных средств (метимазол, пропилтиоурацил, тиоурацил), сердечно-сосудистых препаратов (алпренолол, амиодарон, амринон, каптоприл, дигитоксин, мексилетин, нитроглицерин, оксипренолол, хинидин, резерпин, токаинид), диуретиков (фуросемид, тиазиды, триамтерен, ацетазоламид, буметанид, диазоксид, ртутные диуретики), металлов (висмут, ртуть, соединения золота, серебро), гипогликемических препаратов (карбутамид, хлорпропамид, глибенкламид, инсулин, толбутамид), психотропных препаратов (амитриптиллин, дезипрамин, барбитураты, мепробамат, хлорпропазин, трифлуоперазин), других препаратов (аллопуринол, хлорохин, циметидин, колхицин, циклоспорин, декстроамфетамин, динитрофенол, спорынья, эстрогены, ганцикловир, гепарин, гидроксихлорохин, альфа-интерферон, левамизол, метилдопа, пеницилламин, иодид калия, преднизон, прокаин, хинин, ранитидин, тимоксифен, тиклопидин, витамин К), алкоголя.

Причины повышения (тромбоцитоз):

• Первичные: эссенциальная тромбоцитэмия, эритрэмия, миелопролиферативные заболевания (хронический миелолейкоз и миелофиброз);
• Вторичные (реактивные, на фоне заболеваний): при аутоиммунных заболеваниях (ревматизм, ревматоидный артрит, болезнь Бехтерева, синдром Чарг-Стросса) и воспалительных (язвенный колит, остеомиелит), инфекционных (туберкулез), онкогематологических (карцинома, лимфома, лимфогранулематоз), после острой кровопотери (в т. ч. 2 недели после операций) или острого гемолиза (отравление уксусом, гемолитические анемии), удаления селезенки, цирроза печени, амилоидоза;
• Физиологические: физическое перенапряжение.